Efeito da desmineralização óssea sobre parâmetros de superfície e sobre o comportamento de pré-osteoblastos em cultura: estudo em microscopia eletrônica de varredura e confocal / Effect of bone demineralization on surface parameters and on behavior of pre-osteoblasts in culture: study in scanning electron microscopy and confocal microscopy

A desmineralização óssea superficial tem se demonstrado favorável à consolidação de enxertos e ao comportamento celular, entretanto os mecanismos envolvidos ainda não estão esclarecidos. Os subsídios para o embasamento biológico da desmineralização, proporcionado por publicações anteriores, sugeriram que modificações na superfície óssea teriam influenciado o comportamento de pré-osteoblastos em cultura. Assim, este estudo objetivou comparar o efeito de duas concentrações de ácido cítrico na desmineralização de superfícies ósseas onde foram cultivadas células pré-osteoblásticas (MC3T3-E1), e analisar parâmetros de superfície comparando superfícies desmineralizadas a não desmineralizadas. Setenta amostras ósseas bicorticais foram removidas das calvárias de 35 ratos e divididas em grupos para as análises: 1) Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) para avaliação da área de recobrimento e espessura da camada de células sobre as amostras (n = 15) durante 24, 48 e 72 horas: Grupo AC.10 – amostras desmineralizadas por 30 segundos com ácido cítrico 10 %; Grupo AC.50 –amostras desmineralizadas por 30 segundos com ácido cítrico 50 %; e Grupo C (controle) – amostras não desmineralizadas; 2) Microscopia Confocal para análise da área de expressão e intensidade de fluorescência das BMP-2, -4 e -7: AC.10 – seis amostras desmineralizadas conforme item 1); AC.50 – seis amostras desmineralizadas conforme item 1); C – três amostras não desmineralizadas; 3) Microscopia Confocal para análise da rugosidade superficial média (Ra e Sa): Grupos AC.10 e AC.50 com cinco amostras cada, desmineralizadas conforme o item 1), sendo cada amostra seu próprio controle (análises antes e depois da desmineralização). Também foram avaliadas as distâncias entre picos (P-P) e entre picos e vales (P-V) antes e depois da desmineralização; 4) Microscopia Eletrônica de Varredura / Espectroscopia de Energia Dispersiva (MEV / EDS) para análise da composição superficial: mesmas...

The superficial bone demineralization has proved to be a favorable procedure for bone grafts consolidation and cell behavior, however the underlying mechanisms have not been clarified yet. Therefore, this study aimed to compare the effect of two concentrations of citric acid on demineralization of bone surfaces where pre-osteoblastic cells (MC3T3-E1) were cultivated, and analyze surface parameters comparing demineralized bone surfaces with non-demineralized surfaces. Seventy bicortical bone samples were harvested from the calvaria of 35 rats and divided into groups as follows: 1) Scanning Electron Microscopy (SEM) to evaluate the coating area and thickness of cells layers cultured on the samples (n = 15) for 24, 48, and 72 hours: Group CA.10 – samples demineralized for 30 seconds with 10 % citric acid; Group CA.50 – samples demineralized for 30 seconds with 50 % citric acid, and Group C (control) – non-demineralized samples; 2) Confocal Microscopy for analysis of expression area and intensity of fluorescence of BMP-2, -4, and -7: CA.10 – six samples demineralized as item 1); CA.50 – six samples demineralized as item 1); Group C – three non-demineralized samples; 3) Confocal Microscopy for surface mean roughness analysis (Ra and Sa): Groups CA.10 and CA.50 made up of five samples each and demineralized according to item 1), each sample was its own control (analysis before and after demineralization). The distances between peaks (P-P) and between peaks and valleys (P-V) were also evaluated before and after demineralization; 4) Scanning Electron Microscopy / Energy Dispersive Spectroscopy (SEM / EDS) to analyze the surface composition: the same samples of item 3) were evaluated before and after demineralization for atomic percentage (%A) of carbon, oxygen, magnesium, phosphorus, sulfur and calcium. Statistical test was made by adopting the 95 % significance level. Demineralized samples showed cells with morphology in the later stages of differentiation...

Efeito da desmineralização óssea sobre parâmetros de superfície e sobre o comportamento de pré-osteoblastos em cultura: estudo em microscopia eletrônica de varredura e confocal / Effect of bone demineralization on surface parameters and on behavior of pre-osteoblasts in culture: study in scanning electron microscopy and confocal microscopy

A desmineralização óssea superficial tem se demonstrado favorável à consolidação de enxertos e ao comportamento celular, entretanto os mecanismos envolvidos ainda não estão esclarecidos. Os subsídios para o embasamento biológico da desmineralização, proporcionado por publicações anteriores, sugeriram que modificações na superfície óssea teriam influenciado o comportamento de pré-osteoblastos em cultura. Assim, este estudo objetivou comparar o efeito de duas concentrações de ácido cítrico na desmineralização de superfícies ósseas onde foram cultivadas células pré-osteoblásticas (MC3T3-E1), e analisar parâmetros de superfície comparando superfícies desmineralizadas a não desmineralizadas. Setenta amostras ósseas bicorticais foram removidas das calvárias de 35 ratos e divididas em grupos para as análises: 1) Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) para avaliação da área de recobrimento e espessura da camada de células sobre as amostras (n = 15) durante 24, 48 e 72 horas: Grupo AC.10 – amostras desmineralizadas por 30 segundos com ácido cítrico 10 %; Grupo AC.50 –amostras desmineralizadas por 30 segundos com ácido cítrico 50 %; e Grupo C (controle) – amostras não desmineralizadas; 2) Microscopia Confocal para análise da área de expressão e intensidade de fluorescência das BMP-2, -4 e -7: AC.10 – seis amostras desmineralizadas conforme item 1); AC.50 – seis amostras desmineralizadas conforme item 1); C – três amostras não desmineralizadas; 3) Microscopia Confocal para análise da rugosidade superficial média (Ra e Sa): Grupos AC.10 e AC.50 com cinco amostras cada, desmineralizadas conforme o item 1), sendo cada amostra seu próprio controle (análises antes e depois da desmineralização). Também foram avaliadas as distâncias entre picos (P-P) e entre picos e vales (P-V) antes e depois da desmineralização; 4) Microscopia Eletrônica de Varredura / Espectroscopia de Energia Dispersiva (MEV / EDS) para análise da composição superficial: mesmas...

The superficial bone demineralization has proved to be a favorable procedure for bone grafts consolidation and cell behavior, however the underlying mechanisms have not been clarified yet. Therefore, this study aimed to compare the effect of two concentrations of citric acid on demineralization of bone surfaces where pre-osteoblastic cells (MC3T3-E1) were cultivated, and analyze surface parameters comparing demineralized bone surfaces with non-demineralized surfaces. Seventy bicortical bone samples were harvested from the calvaria of 35 rats and divided into groups as follows: 1) Scanning Electron Microscopy (SEM) to evaluate the coating area and thickness of cells layers cultured on the samples (n = 15) for 24, 48, and 72 hours: Group CA.10 – samples demineralized for 30 seconds with 10 % citric acid; Group CA.50 – samples demineralized for 30 seconds with 50 % citric acid, and Group C (control) – non-demineralized samples; 2) Confocal Microscopy for analysis of expression area and intensity of fluorescence of BMP-2, -4, and -7: CA.10 – six samples demineralized as item 1); CA.50 – six samples demineralized as item 1); Group C – three non-demineralized samples; 3) Confocal Microscopy for surface mean roughness analysis (Ra and Sa): Groups CA.10 and CA.50 made up of five samples each and demineralized according to item 1), each sample was its own control (analysis before and after demineralization). The distances between peaks (P-P) and between peaks and valleys (P-V) were also evaluated before and after demineralization; 4) Scanning Electron Microscopy / Energy Dispersive Spectroscopy (SEM / EDS) to analyze the surface composition: the same samples of item 3) were evaluated before and after demineralization for atomic percentage (%A) of carbon, oxygen, magnesium, phosphorus, sulfur and calcium. Statistical test was made by adopting the 95 % significance level. Demineralized samples showed cells with morphology in the later stages of differentiation...

Alterações Ósseas e do Sistema Estomatognático associadas a Doenças Endócrino Metabólicas / Cambios en los huesos y del sistema estomatognático asociadas con las enfermedades endocrino-metabólicas / Diseases Bone Changes and changes in the Stomatognathic System Associated with Metabolic Endocrine Diseases

Introdução: a prevalência de doenças endócrino-metabólicas tem aumentado nos últimos anos com a melhoria da expectativa de vida da população. Diabete Melittus, hipotireoidismo, hipertireoidismo, hipoparatireoidismo e hiperparatireoidismo podem levar as alterações no sistema estomatognático, contudo, a literatura ainda é limitada nesta área. Objetivo: Abordar as características e o processo fisiopatológico de doenças endócrino-metabólicas, com destaque para as alterações ósseas e do sistema estomatognático. Metodologia: Os dados foram coletados através da seleção de artigos sobre alterações ósseas e do sistema estomatognático associadas ao hipotireoidismo, hipertireoidismo, hipoparatireoidismo, hiperparatireoidismo e diabete mellitus, publicados nos bancos de dados, Bireme, MEDLINE e Scielo. Resultados: Foram coletados 73 artigos publicados na literatura entre os anos 1995 e 2012, dos quais 40 foram selecionados por se enquadrar no tema proposto. A literatura consultada demonstrou que alterações dos níveis séricos dos hormônios tireoidianos e do paratormônio, assim como diabete mellitus, influenciam no metabolismo ósseo. Atrasos na esfoliação e erupção dentária, no crescimento e desenvolvimento ósseo são observados no hipotireoidismo, enquanto o hipertireoidismo apresenta densidade óssea mineral diminuída, osteoporose dos ossos maxilares, esfoliação acelerada dos dentes decíduos e erupção prematura dos permanentes. No hipoparatireoidismo, observa-se osteoesclerose, dentição hipoplásica e reduzida remodelação óssea. Intensa atividade osteoclástica, ausência de lâmina dura e tumor marrom podem estar presentes no hiperparatireoidismo. Diabete mellitus pode ocasionar oesteoporose, doença periodontal e hipoplasia de esmalte. Embora conhecidas, a magnitude e as causas destas alterações no sistema estomatognático ainda são pouco elucidadas. Conclusões: É imprescindível que o cirurgião dentista tenha conhecimento sobre as manifestações locais ou sistêmicas associadas a estas desordens endócrino-metabólicas que podem acometer os pacientes, para que possa reconhecê-las e contribuir com o seu diagnóstico e tratamento precoces(AU)

Introducción: La prevalencia de las enfermedades endocrino-metabólicas se ha incrementado en los últimos años por el incremento de la esperanza de vida de la población. La diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipoparatiroidismo e hiperparatiroidismo pueden presentar alteraciones en el sistema estomatognático, sin embargo, los estudios encontrados en la literatura son todavía limitados en esta área. Objetivo: abordar las características y procesos fisiopatológicos de estas enfermedades y los cambios especialmente en los huesos y del sistema estomatognático. Métodos: los datos fueron recolectados a través de la selección de artículos sobre las alteraciones óseas del sistema estomatognático en pacientes afectados con el hipotiroidismo, el hipertiroidismo, el hipoparatiroidismo, el hiperparatiroidismo y la diabetes mellitus, publicada en las bases de datos, BIREME, SciELO y MEDLINE. Resultados: se recolectaron 73 artículos publicados entre los años 1995 y 2012, de los cuales 40 fueron seleccionados por la relación con el tema de interés para nuestro propósito. La literatura ha demostrado que los cambios en los niveles séricos de la hormona tiroidea y paratiroidea, y la diabetes mellitus afectan el metabolismo óseo. En el hipotiroidismo se observan retrasos en la exfoliación y erupción de los dientes, en el crecimiento y desarrollo óseo. El hipertiroidismo, hay disminución de la densidad mineral ósea, osteoporosis de los huesos de la mandíbula, exfoliación acelerada de los dientes temporales y erupción prematura de los permanentes. En el hipoparatiroidismo, se observan osteosclerosis, dientes hipoplásicos, y remodelación ósea reducida. Puede estar presente intensa actividad de los osteoclastos, ausencia de la lámina dura y tumor pardo en el hiperparatiroidismo. La diabete mellitus puede causar oesteoporosis, enfermedad periodontal e hipoplasia del esmalte. Aunque conocidas, la magnitud y las causas de estos cambios en el sistema estomatognático aún no están claros.Conclusiones: es esencial que el dentista tenga conocimiento de las manifestaciones locales o sistémicas asociadas con estos trastornos endocrinos y metabólicos para que pueda reconocerlos y ayudar en el diagnóstico precoz y el tratamiento(AU)

Introduction: the prevalence of endocrine-metabolic diseases has increased in recent years due to improvement of the life expectancy of the population. Diabetes mellitus, hypothyroidism, hyperthyroidism, hypoparathyroidism and hyperparathyroidism may present alterations in the stomatognathic system; however, some studies found in literature are still limited in this area. Objective: to address the characteristics and pathophysiological process of these diseases, especially bone changes and in the stomatognathic system. Methods: data were collected through the selection of articles about bone alterations of the stomatognathic system associated with hypothyroidism, hyperthyroidism, hypoparathyroidism, hyperparathyroidism, and diabetes, published in databases, BIREME, MEDLINE and SciELO. Results: seventy three articles published between 1995 y 2012 were revised, and 40 were selected on the basis of their association with the topic of interest. It has shown that changes in serum levels of thyroid and parathyroid hormones, and diabetes mellitus have an impact on bone metabolism. Delays in tooth eruption and exfoliation, bone growth and development are observed in hypothyroidism, whereas decreased bone mineral density, jawbones osteoporosis, accelerated exfoliation of deciduous teeth and premature eruption of permanent teeth were observed in hyperthyroidism. In hypoparathyroidism, there were osteosclerosis, hypoplastic teeth, and reduced bone remodeling. Intense osteoclastic activity, brown tumors and the absence of lamina dura in hyperparathyroidism may be observed. Diabetes mellitus can cause osteoporosis, periodontal disease and enamel hypoplasia. Although they are known, the magnitude and causes of these changes in the stomatognathic system are still unclear. Conclusions: it is essential that dentist can recognize the local or systemic manifestations associated with these endocrine and metabolic disorders and help to early diagnosis and treatment(AU)

Efeito da desmineralização ácida da interface enxerto-leito na consolidação de enxertos ósseos autógenos em bloco / Influence of acid demineralization of contacting osseous surfaces on the consolidation of autogenous onlay bone grafts

Para testar a hipótese de que a desmineralização in situ das superfícies de contato enxerto-leito, e a forma como o enxerto é estabilizado ao leito, podem influenciar os mecanismos envolvidos na consolidação do enxerto, fragmentos ósseos de 10 mm de diâmetro foram removidos das metáfises proximais tibiais de 36 coelhos (Oryctolagus Cuniculus) e transplantados para uma área adjacente. Na tíbia esquerda dos animais, as superfícies de contato do enxerto e do leito hospedeiro foram desmineralizadas com ácido cítrico pH 1,0 por 3 minutos antes dos enxertos serem fixados ao leito. Na tíbia direita, o transplante do bloco ósseo não foi precedido de desmineralização. Metade dos enxertos foi imobilizada sobre o leito pela superposição de uma membrana não reabsorvível de politetrafluoretileno colada com cianoacrilato ao leito à distância da interface enxerto-leito. A outra metade dos enxertos foi fixada por um parafuso de titânio no centro do enxerto. Assim, foram formados 4 grupos de estudo: membrana (M), membrana + ácido (MA), parafuso (P) e parafuso + ácido (PA). Três animais de cada grupo forneceram espécimes para análise microscópica quantitativa e qualitativa aos 15, 30 e 45 dias de pós-operatório. A análise qualitativa demonstrou que não houve formação óssea na interface em nenhum espécime aos 15 dias e que nos demais períodos, em todos os grupos, a quantidade de tecido ósseo neoformado na interface e seu estágio de maturação aumentaram com o tempo. Ambos os métodos de fixação empregados foram eficientes em manter os enxertos em posição, porém a membrana promoveu menor reabsorção da estrutura do enxerto. A análise quantitativa computadorizada revelou que, aos 30 dias, os grupos MA e PA apresentaram maior área de formação óssea na interface (71,34 ± 12,03%; 56,74 ± 2,15% respectivamente) em relação aos grupos M e P (51,75 ± 11,02%; 43,95 ± 4,05% respectivamente) e superfícies de consolidação óssea mais extensas (93,41 ± 5,95%; 93,73 ± 4,96%...

In order to test the hypothesis that the demineralization "in situ" of contacting surfaces of bone graft/bone bed and the fixation method used for graft stabilization can influence the mechanisms involved in the consolidation of the graft, bone fragments of 10 mm in diameter were removed from the proximal tibial metaphysis of thirty-six male rabbits (Oryctolagus Cuniculus) and transplanted to an adjacent area. In the left tibia of the animals, the contacting surfaces of the graft and host bed were demineralized with citric acid pH 1.0 for 3 minutes before the grafts were fixed to the receptor bed. In the right tibia, the bone block transplantation was not preceded by demineralization. Half of the grafts were immobilized on the bone bed by a nonresorbable polytetrafluoroethylene membrane glued with cyanoacrylate adhesive to the host bed distant from the bone graft-bone bed interface. The other half of the grafts were fixed by a titanium screw in the center of the graft. Thus, four groups were formed: membrane (M), membrane + acid (MA), screw (P) and screw + acid (PA). Three animals from each group provided specimens for quantitative and qualitative microscopic analysis at 15, 30 and 45 days postoperatively. Qualitative analysis showed no significant bone formation at the interface in any specimen of the groups at 15 days and on the other periods in all groups, the amount of newly formed bone at the interface as well as the stage of bone maturation increased with time. Both fixation methods were effective in maintaining the graft in position, but the membrane resulted in less resorption of the graft. Quantitative analysis, performed by means of a computer program for image analysis, showed that at day 30, groups MA and PA, showed greater area of bone formation at the interface (71.34 ± 12.03%; 56.74 ± 2 15%) than groups M and P (51.75 ± 11.02%, 43.95 ± 4.05%) and more osseointegrated bone surfaces (93.41 ± 5.95%, 93.73 ± 4.96%) than those...

Efeito da desmineralização ácida da interface enxerto-leito na consolidação de enxertos ósseos autógenos em bloco / Influence of acid demineralization of contacting osseous surfaces on the consolidation of autogenous onlay bone grafts

Para testar a hipótese de que a desmineralização in situ das superfícies de contato enxerto-leito, e a forma como o enxerto é estabilizado ao leito, podem influenciar os mecanismos envolvidos na consolidação do enxerto, fragmentos ósseos de 10 mm de diâmetro foram removidos das metáfises proximais tibiais de 36 coelhos (Oryctolagus Cuniculus) e transplantados para uma área adjacente. Na tíbia esquerda dos animais, as superfícies de contato do enxerto e do leito hospedeiro foram desmineralizadas com ácido cítrico pH 1,0 por 3 minutos antes dos enxertos serem fixados ao leito. Na tíbia direita, o transplante do bloco ósseo não foi precedido de desmineralização. Metade dos enxertos foi imobilizada sobre o leito pela superposição de uma membrana não reabsorvível de politetrafluoretileno colada com cianoacrilato ao leito à distância da interface enxerto-leito. A outra metade dos enxertos foi fixada por um parafuso de titânio no centro do enxerto. Assim, foram formados 4 grupos de estudo: membrana (M), membrana + ácido (MA), parafuso (P) e parafuso + ácido (PA). Três animais de cada grupo forneceram espécimes para análise microscópica quantitativa e qualitativa aos 15, 30 e 45 dias de pós-operatório. A análise qualitativa demonstrou que não houve formação óssea na interface em nenhum espécime aos 15 dias e que nos demais períodos, em todos os grupos, a quantidade de tecido ósseo neoformado na interface e seu estágio de maturação aumentaram com o tempo. Ambos os métodos de fixação empregados foram eficientes em manter os enxertos em posição, porém a membrana promoveu menor reabsorção da estrutura do enxerto. A análise quantitativa computadorizada revelou que, aos 30 dias, os grupos MA e PA apresentaram maior área de formação óssea na interface (71,34 ± 12,03%; 56,74 ± 2,15% respectivamente) em relação aos grupos M e P (51,75 ± 11,02%; 43,95 ± 4,05% respectivamente) e superfícies de consolidação óssea mais extensas (93,41 ± 5,95%; 93,73 ± 4,96%...

In order to test the hypothesis that the demineralization "in situ" of contacting surfaces of bone graft/bone bed and the fixation method used for graft stabilization can influence the mechanisms involved in the consolidation of the graft, bone fragments of 10 mm in diameter were removed from the proximal tibial metaphysis of thirty-six male rabbits (Oryctolagus Cuniculus) and transplanted to an adjacent area. In the left tibia of the animals, the contacting surfaces of the graft and host bed were demineralized with citric acid pH 1.0 for 3 minutes before the grafts were fixed to the receptor bed. In the right tibia, the bone block transplantation was not preceded by demineralization. Half of the grafts were immobilized on the bone bed by a nonresorbable polytetrafluoroethylene membrane glued with cyanoacrylate adhesive to the host bed distant from the bone graft-bone bed interface. The other half of the grafts were fixed by a titanium screw in the center of the graft. Thus, four groups were formed: membrane (M), membrane + acid (MA), screw (P) and screw + acid (PA). Three animals from each group provided specimens for quantitative and qualitative microscopic analysis at 15, 30 and 45 days postoperatively. Qualitative analysis showed no significant bone formation at the interface in any specimen of the groups at 15 days and on the other periods in all groups, the amount of newly formed bone at the interface as well as the stage of bone maturation increased with time. Both fixation methods were effective in maintaining the graft in position, but the membrane resulted in less resorption of the graft. Quantitative analysis, performed by means of a computer program for image analysis, showed that at day 30, groups MA and PA, showed greater area of bone formation at the interface (71.34 ± 12.03%; 56.74 ± 2 15%) than groups M and P (51.75 ± 11.02%, 43.95 ± 4.05%) and more osseointegrated bone surfaces (93.41 ± 5.95%, 93.73 ± 4.96%) than those...

Análisis geométrico de la arquitectura trabecular de un hueso de bovino durante el proceso inducido de desmineralización / Geometric analysis of the trabecular architecture in a bovine bone during the process of induced demineralization

La masificación de la radiología digital ha hecho posible el estudio de diferentes patologías mediante imágenes de alta calidad diagnóstica. Existen diferentes patologías que afectan al tejido óseo, y que producen pérdida del mineral(1). Aquellas patologías se caracterizan por la pérdida de la arquitectura trabecular y un adelgazamiento de la cortical(7), visibles en la radiología. Aquellos cambios llevan al paciente a caer en el riesgo de sufrir futuras fracturas(8), por lo que se considera importante realizar un análisis de la geometría de las trabéculas ante este tipo de patología, con el fin de prever riesgos de fractura. Material y Métodos. Para realizar este estudio, se escogió un fémur de bovino(19). Este fue sumergido en ácido acético al 4 por ciento, con el fin de producir su desmineralización. Se le realizó una medición cada 24 horas mediante la adquisición de imágenes radiológicas, que fueron obtenidas con un equipo digital directo hasta observar cambios radiológicos evidentes en la población trabecular. Las imágenes fueron evaluadas mediante un software de libre acceso llamado ImageJ®(23), realizando mediciones trabeculares mediante la herramienta ROI, y se adquirieron los valores de área, perímetro y circularidad. Resultados. En las 10 trabéculas estudiadas se observaron y cuantificaron cambios en la arquitectura trabecular, aumentando el área en un 124 por ciento, el perímetro en un 53 por ciento y la circularidad se mantuvo en promedio constante. Conclusiones: Mediante la radiología digital, es posible evaluar la arquitectura trabecular mediante parámetros geométricos, los cuales nos indican que existen cambios muy pequeños a lo largo del tiempo. Se observó un aumento de tamaño en las trabéculas, pero sin pérdida de su forma.

Introduction. The mass use of digital radiology has made possible the study of different pathologies through high quality diagnostic images. There are different diseases that affect bone tissue and which produce mineral loss (1). Those diseases are characterized by loss of trabecular architecture and cortical thinning (7), visible in radiology. Those changes lead the patient to suffer the risk of future fractures (8), therefore it is considered important to analyze the geometry of the trabeculae in this kind of pathology in order to anticipate fracture risk. Material and Methods. For this study, a bovine's femur was chosen(19). This was immersed in 4 percent acetic acid to produce demineralization. Measurement was performed (in Clinica Alemana Santiago) every 24 hours by radiological imagings, which were obtained with digital radiology (DR) to observe obvious radiological changes in trabecular population. The images were evaluated by a freely available software called ImageJ® (23), by performing Trabecular measurements using the ROI tool, acquiring the values of area, perimeter and circularity. Results. In the 10 trabeculae studied, we observed and quantified changes in trabecular architecture, increasing the value of average area in 124 percent, perimeter in 53 percent and no change in circularity during the demineralization process. Conclusions. With digital radiography, it is possible to evaluate the trabecular architecture using geometric parameters, which indicate that there are very small changes over time. An increase in size of the trabeculae was observed, trabeculae was observed, but without loss of shape.

Efeito da desmineralização óssea superficial na migração, adesão e diferenciação de pré-osteoblastos / The effect of surface bone demineralization on the migration, adhesion and differentiation of pre-osteoblasts

Resultados de pesquisas prévias tem encontrado potencial aumentado para a consolidação de enxertos ósseos mediante desmineralização do material enxertado e/ou das superfícies de consolidação. Entretanto há carência de embasamento apoiado em evidências biológicas do benefício de tal procedimento. Para testar esta hipótese, o tecido ósseo da calvária de cobaias (Cavia porcellus) foi exposto ao condicionamento por ácido cítrico durante 15, 30, 90 e 180 segundos (grupos teste). Quarenta e cinco discos ósseos de três milímetros de diâmetro foram removidos dos animais, dos quais 36 foram condicionados com ácido cítrico pH 1 a 50% e nove não receberam condicionamento (grupo controle). Sobre nove discos de cada grupo foram cultivados pré-osteoblastos MC3T3-E1 durante 24, 48 e 72 horas (três discos de cada grupo em cada tempo). Análises da morfologia celular, do número de células aderidas sobre as superfícies e da área de cobertura destas superfícies por préosteoblastos foram realizadas à microscopia eletrônica de varredura. Observou-se aumento do número de células aderidas às superfícies com o tempo, independentemente de haver condicionamento ou de seu tempo de aplicação. Entretanto, essa diferença só foi estatisticamente significante intragrupos (p<0,05) e quando comparados os períodos de 24 e 72 horas de incubação. A área de cobertura das superfícies por células aumentou significantemente com o tempo somente nos grupos teste, também entre os períodos de incubação de 24 e 72 horas (p<0,01). O grupo controle apresentou-se com 50% ou menos de área de cobertura superficial em relação aos demais. A duração de aplicação do ácido não interferiu significantemente nesse parâmetro de avaliação, mas nos grupos 15 e 30, a área de recobrimento ósseo mais do que triplicou às 72 horas em relação às 24 horas (p<0,01), com cerca de 70% das superfícies cobertas por células, contra 30% no grupo controle. Conclui-se que a desmineralização óssea...

Results of previous research has found increased potential for the consolidation of bone grafts by demineralization of the graft material and / or areas of consolidation. However there is a lack of foundation supported by biological evidence of benefits from such procedures. To test this hypothesis, the bone tissue of the calvaria of guinea pigs (Cavia porcellus) were exposed to conditioning by citric acid for 15, 30, 90 and 180 seconds (test group). Forty-five bone disks measuring three millimeters in diameter were removed from the animals, of which 36 were conditioned with citric acid pH 1 to 50% and nine did not receive conditioning (control group). About nine disks in each group were pre-cultured with MC3T3- E1 osteoblasts for 24, 48 and 72 hours (three discs of each group at each time point). Analysis of cell morphology, number of cells attached on the surface and the coverage area of these surfaces by pre-osteoblasts were performed on scanning electron microscopy. There was na increase in the number of cells attached to surfaces over time, regardless of conditioning or application time. However, this difference was not statistically significant intra-group (p <0.05) when comparing the periods of 24 and 72 hours of incubation. The coverage area of the surfaces of cells increased significantly with time only in the test groups, also among the incubation periods of 24 and 72 hours (p <0.01). The control group presented with 50% or less of surface area coverage compared to the other. The duration of application of the acid did not affect significantly this parameter of evaluation, but in groups 15 and 30, the bonearea covered more than tripled from 24 to 72 hours (p <0.01), with about 70 % of the area covered by cells, versus 30% in the control group. It was concluded that bone demineralization in the studied conditioning times provides a substrate on which cells acquire pre-osteoblastic morphology compatible with...

Dinámica de la descalcificación de tejido mineralizado de perros a través de microondas / Decalcification dynamic of dog mineralized tissue by microwaves

The aim of this article is to present the decalcification process dynamic of mineralized tissue in dogs, teeth and jaw, comparing the traditional decalcification method, immersion, and microwave, immersion followed by irradiation using a domestic microwave oven, accompanying the liberation of calcium through spectrophotometer of atomic absorption. It was used as decalcified agent, EDTA solution or nitric acid. The results showed that with the use of nitric acid (5 percent), after 15 days, the irradiated fragments could be processed for histological analysis, otherwise the tooth not irradiated need to be submerged for 65 days. The EDTA decalcified action was slower than the nitric acid. The histological observations of the irradiated samples showed an excellent preservation of the morphological characteristics, independently of the decalcified agent used.

El objetivo de este artículo fue presentar, un método de descalcificación dinámico de tejido mineralizado de perros, dientes y mandíbula, comparando el método de descalcificación tradicional e irradiación en horno de microondas, analizando la liberación de calcio en espectro fotómetro de absorción atómica. Usamos como agente descalcificante, solución de EDTA y acido nítrico. Los resultados mostraron que los fragmentos descalcificados con ácido nítrico después de 15 días, ya podían ser preparados para análisis histológico, el diente al ser irradiado tardó 65 días para ser descalcificado. El EDTA descalcificó lentamente, en relación al ácido nítrico. Las observaciones histológicas de las muestras irradiadas mostraron una excelente preservación de las características morfológicas independiente del agente descacificador usado.

Retalho ósseo pré-fabricado com osso homógeno: estudo da maturaçäo óssea em um modelo experimental / Prefabricated homogenous bone flap: bone maturation study as an experimental model

As opções convencionais de tratamento de perdas ósseas, como enxertos e retalhos não são satisfatórias. Com isso uma nova categoria de retalhos, o retalho pré-fabricado (RPF), passou a ser estudada. Foram retirados 42 ossos metatársicos-I das patas traseiras de 21 ratos Wistar. O grupo I (n=21) foi descalcificado e liofilizado e o grupo II (n=21) foi não descalcificado e congelado a -70ÝC. Após 3 semanas os ossos foram enxertados em 21 animais sobre os vasos epigástricos inferiores nas regiões inguinal direita e esquerda, individualizados por uma lâmina de silicone. Os grupos I e II foram divididos em três subgrupos cada, de acordo com o tempo de permanência (1, 2 e 4 semanas) após a pré-fabricação do retalho. No estudo histológico macroscópico os grupos apresentaram diferenças em morfologia e consistência: o grupo I mostrou perda da arquitetura óssea e da rigidez e grupo II mantiveram sua forma, rigidez e consistência. Na análise qualitativa alterações foram observadas nos fragmentos do grupo desmineralizado e liofilizado, especialmente no subgrupo de 2 semanas. O grupo II não apresentou alteração no aspecto do tecido ósseo mineralizado entre os diversos subgrupos. É nítida a diferença histológica entre os RPF com osso descalcificado e liofilizado quando comparado ao não descalcificado e congelado. A reabsorção óssea gradual sugere que a rotação do retalho deve ocorrer precocemente. Este estudo demonstra a aplicabilidade do osso homógeno para pré-fabricação de retalhos.

Alteraçöes histológicas em enxerto de osso homógeno preparado e armazenado com duas técnicas diferentes / Histological alterations in homogenous bone graft prepared and storage with two different tecniques

Esta pesquisa analisa as alterações histológicas de enxerto ósseo homógeno preparado de diferentes modos. Em um grupo, ossos metatársicos-l de ratos foram armazenados a -70Ý Celsius e em outro grupo, os ossos foram descalcificados e estocados em temperatura ambiente após terem sido liofilizados. Esses ossos foram enxertados nas regiões inguinais de ratos e retirados para estudo histológico no trigésimo dia de pós-operatório. Macroscopicamente os ossos não descalcificados e armazenados a -70ÝC estavam envoltos por uma cápsula delgada, facilmente desprendida e apresentavam consistência de osso cortical. Microscopicamente observou-se absorção da superfície endostal com diminuição da camada cortical e aumento da cavidade medular. A cortical estava sofrendo processo de reabsorção e a superfície óssea externa possuía uma cápsula fibrosa delgada e células inflamatórias. Os ossos descalcificados e liofilizados, na macroscopia, apresentavam-se de consistência amolecida e estavam envoltos por uma cápsula espessa e firmemente aderida. Microscopicamente, a maior parte da arquitetura óssea estava preenchida por material acelular e avascular, muito semelhante à cartilagem e envolvendo o tecido, uma cápsula fibrosa espessa com células inflamatórias. Portanto, existiam diferenças histológicas dos enxertos ósseos homógenos, dependendo do preparo e do armazenamento do osso.